Page 193 - 2010-2011

192
2.3.6 Προσδιορισμός έκθεσης αγροτικού πληθυσμού της περιοχής υλοποίησης του
Προγράμματος LIFE EcoPest σε φυτοπροστατευτικά προϊόντα και ανίχνευση
πρόδρομων επιδράσεων
Διενεργήθηκε μελέτη προσδιορισμού των επιπέδων έκθεσης σε φ.π. των αγροτών/ψεκαστών
από την περιοχή της Βοιωτίας για την ανίχνευση πρόδρομων επιδράσεων στο γενετικό τους υλικό.
Συγκεκριμένα, ελήφθησαν δείγματα αίματος και ούρων από εικοσιεπτά (27) επαγγελματίες ψεκαστές
σε δύο χρονικές στιγμές: πριν την έκθεση σε οποιαδήποτε φ.π. και αμέσως μετά την εφαρμογή φ.π.
Στα δείγματα αυτά πραγματοποιείται προσδιορισμός των επίπεδων υπολειμμάτων δραστικών ουσιών
φ.π. και μεταβολιτών τους καθώς οι πρόδρομες αλλοιώσεις στο γενετικό υλικό.
Η αναλυτική μέθοδος είναι βασισμένη στην Αέριο Χρωματογραφία Φασματομετρίας Μάζας
Τριπλού Τετραπόλου (GC-MS-MS) για τον προσδιορισμό δώδεκα φ.π. και μεταβολιτών τους, τα οποία
είναι αυτά που δηλώθηκαν ότι χρησιμοποιήθηκαν από τους ψεκαστές για την τρέχουσα καλλιεργητική
περίοδο.
Για την ανίχνευση των αλλοιώσεων του DNA εφαρμόζεται η μέθοδος comet assay που
περιλαμβάνει την ηλεκτροφόρηση των δειγμάτων αίματος, την ανάλυση εικόνας και τη στατιστική
επεξεργασία για την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων. Τέλος διενεργείται στατιστική ανάλυση για τον
συσχετισμό των επιδράσεων επί του DNA με τα επίπεδα των συστηματικά διαθέσιμων επιπέδων
γεωργικών φαρμάκων.
ΤΜΗΜΑ Ελέγχου Γεωργικών Φαρμάκων και
Φυτοφαρμακευτικής
ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ Τοξικολογικού Ελέγχου Γεωργικών
Φαρμάκων
ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ ΕΡΓΟΥ Δρ Κ. Κυριακοπούλου
ΕΜΠΛΕΚΟΜΕΝΟ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟ Δρ Κ. Μαχαίρα, Δρ Κ. Κασιώτης
ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΕΡΓΟΥ (ΕΝΑΡΞΗ - ΛΗΞΗ) 1 έτος
Π ΗΓΗ ΧΡΗΜΑΤΟΔΟΤΗΣΗΣ ΜΦΙ
2.3.7 In vitro μελέτη της πιθανής προστατευτικής δράσης ενάντια στο οξειδωτικό
stress φυτικών εκχυλισμάτων
Σκοπός της συγκεκριμένης μελέτης είναι να επιλεγούν ουσίες που έχουν απομονωθεί από
φυτικά εκχυλίσματα προκειμένου να ελεγχθεί η πιθανή προστατευτική δράση τους in vitro σε
καλλιεργούμενες κυτταρικές σειρές (HepG2, human hepatocarcinoma cells), στις οποίες έχει
προκληθεί οξειδωτικό stress. Η επιλογή των φυτικών εκχυλισμάτων και ουσιών που δοκιμάζονται
γίνεται σε συνεργασία με το Εργαστήριο Φαρμακογνωσίας του ΕΚΠΑ. Η πρώτη ουσία που εξετάζεται
στο πλαίσιο της μελέτης αυτής είναι η ελευροπαίνη.
Oι μέθοδοι που χρησιμοποιούνται προκειμένου να αξιολογηθούν οι επιδράσεις των ουσιών
αυτών στα κύτταρα είναι οι εξής:
• Trypan blue exclusion assay: Για καθορισμό κυτταρικής βιωσιμότητας.
• ΜΤΤ assay: Για προσδιορισμό κυτταρικής βιωσιμότητας/ κυτταροτοξικότητας.
• Comet assay: Για προσδιορισμό αλλοιώσεων γενετικού υλικού λόγω γονοτοξικής δράσης ή
οξειδωτικού στρες καθώς και προστασίας από το οξειδωτικό στρες.
• Modified comet assay με χρήση του ενζύμου FPG προκειμένου να επιβεβαιωθεί ότι οι
προκαλούμενες βλάβες στο DNA οφείλονται σε οξειδωτικό στρες.
• Προσδιορισμός οξείδωσης λιπιδίων σε κυτταρικές καλλιέργειες.
Τα έως τώρα πειράματα έχουν δείξει ότι όλες οι συγκεντρώσεις της ελευροπαΐνης που
χρησιμοποιήθηκαν (0.0001 μM έως 100 μM) δεν επέδειξαν κυτταροτοξική ή γονοτοξική δράση στα
κύτταρα HepG2. Επώαση με 0.1 μΜ ελευροπαΐνης για 24 ώρες φαίνεται ότι αναστρέφει πλήρως τις