Page 80 - ektheseis 2012

78
μικροδορυφορικών γενετικών δεικτών για τη μελέτη της γενετικής παραλλακτικότητας της
παπαρούνας. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιήθηκε μία εμπλουτισμένη βιβλιοθήκη μικροδορυφορικών
δεικτών (enriched microsatellite library) σε συνδυασμό με 454 αλληλούχιση επόμενης γενιάς (454
next-generation sequencing). Συνολικά ελήφθησαν 13.825 αλληλουχίες που οδήγησαν σε 1795 θέσεις
μικροδορυφορικών δεικτών. Μετά την απόρριψη των θέσεων με λιγότερες από έξι επαναλήψεις του
μικροδορυφορικού μοτίβου, η αυτοματοποιημένη σχεδίαση εκκινητών ήταν επιτυχής για 598 θέσεις.
Επιλέγηκαν και δοκιμάστηκαν 74 από αυτές τις θέσεις για την ενίσχυση της αλληλουχίας DNA με ένα
σύνολο 97 ζευγών εκκινητών. Από τις θέσεις που δοκιμάστηκαν, οι 30 πέρασαν τις δοκιμές και στη
συνέχεια ελέγχθηκαν για πολυμορφισμό χρησιμοποιώντας 384 φυτά παπαρούνας από 12
πληθυσμούς που προέρχονταν από τη Γαλλία. Από τις 30 θέσεις, οι 11 έδειξαν αξιόπιστο
πολυμορφισμό που δεν επηρεάστηκε από την παρουσία μηδενικών αλληλομόρφων. Ο αριθμός των
αλληλομόρφων και η αναμενόμενη ετεροζυγωτία κυμάνθηκε από 3 έως 7,4 και 0,27 έως 0,73,
αντίστοιχα. Παρατηρήθηκε μικρή αλλά σημαντική γενετική διαφοροποίηση μεταξύ των πληθυσμών
(FST = 0,04, P <0,001). Οι 11 επικυρωμένοι πολυμορφικοί δείκτες μικροδορυφόρων που
αναπτύχθηκαν σε αυτή την εργασία θα είναι χρήσιμοι σε μελέτες της γενετικής παραλλακτικότητας και
της πληθυσμιακής δομής της παπαρούνας, βοηθώντας στο σχεδιασμό στρατηγικών διαχείρισης για
τον έλεγχο ή τη διατήρηση του είδους.
Τα ανωτέρω έγιναν στο πλαίσιο του έργου: REGPOT BPI-PlantHeal 230010.
ΤΜΗΜΑ Ελέγχου Γεωργικών Φαρμάκων και
Φυτοφαρμακευτικής
ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ Ζιζανιολογίας
ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ ΕΡΓΟΥ Δρ Α. Μαρκέλλου
ΕΜΠΛΕΚΟΜΕΝΟ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟ ΜΦΙ Δρ Β. Κατή
ΕΜΠΛΕΚΟΜΕΝΟ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟ INRA-Dijon: Valérie Le Corre,
Séverine Michel, Christophe Délye
INRA- Clermont-Ferrand: Lydia Jaffrelo,
Charles Poncet
ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΕΡΓΟΥ 1.5.2009 - 31.8.2013
ΣΧΕΤΙΚΗ ENOTHTA “ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΑ ” 1.2.4
2.3.28 Μελέτη της ανθεκτικότητας του ζιζανίου κόνυζας (Conyza spp.) στο
ζιζανιοκτόνο glyphosate (REGPOT BPI-PlantHeal 230010)
Έγιναν πειράματα για την μελέτη της ανθεκτικότητας της κόνυζας (Conyza spp.) στο glyphosate μέσω
της αξιολόγησης πληθυσμών και μελέτης των μηχανισμών ανθεκτικότητας. Πληθυσμοί των 3 ειδών της
κόνυζας (C. canadensis, C. bonariensis και C. albida), που συλλέχθηκαν από 8 περιοχές της χώρας μας
(Λακωνία, Κορινθία, Αργολίδα, Βοιωτία, Αιτωλοακαρνανία, Άρτα, Λευκάδα και Φθιώτιδα), από καλλιέργειες
όπως το αμπέλι, η ελιά, τα εσπεριδοειδή, τα πυρηνόκαρπα και τα μηλοειδή. Σκοπός της αξιολόγησης
αυτής είναι: 1) να εξακριβωθεί το επίπεδο της ανθεκτικότητας (GR50) στο ζιζανιοκτόνο glyphosate, 2) να
μετρηθεί το σικιμικό οξύ ως βιοχημικός δείκτης της ανθεκτικότητας, και 3) να μελετηθούν οι πιθανοί
μηχανισμοί ανάπτυξης ανθεκτικότητας. Τα πειράματα φυτοδοχείων έδειξαν ότι μεγάλος αριθμός
πληθυσμών εμφάνισε ανθεκτικότητα με ένταση της ανθεκτικότητας (GR50; R/S) που κυμάνθηκε από 3 έως
86. Μέτρηση του σικιμικού οξέος in-vivo έδειξε ότι οι ευαίσθητοι πληθυσμοί έχουν σημαντικά υψηλότερα
επίπεδα από τους ανθεκτικούς πληθυσμούς. Μετρήθηκε (μέσω real-time PCR) η σχετική έκφραση
γονιδίων που αναφέρεται ότι εμπλέκονται στο μηχανισμό ανθεκτικότητας της κόνυζας στο glyphosate
(ABC-μεταφορείς και EPSPS) και βρέθηκαν σημαντικά υψηλότερες σχετικές εκφράσεις σε κάποιους R-
(ανθεκτικούς) σε σχέση με S-(ευαίσθητους) πληθυσμούς.