52
ιούς. Για την εφαρμογή της τεχνικής πραγματοποιήθηκε με επιτυχία η εγκατάσταση των φυτών σε
ιστοκαλλιέργεια καθώς και ο μικροπολλαπλασιασμός τους, ενώ βρίσκεται σε εξέλιξη η δοκιμαστική
εφαρμογή δημοσιευμένων πρωτοκόλλων κρυοσυντήρησης σε βλαστοκορυφές (Εικόνες 2.2.1.α-γ).
Γ. Το Εργαστήριο Βακτηριολογίας παραγματοποίησε επισκοπήσεις σε οπωρώνες
πυρηνοκάρπων και γιγαρτοκάρπων σε τέσσερις περιοχές της Χώρας και συλλογή δειγμάτων φυτικών
ιστών για τη διαπίστωση τυχόν παρουσίας σε αυτά φυτοπλασμάτων. Παράλληλα, εντός του 2014,
ολοκληρώθηκε η επεξεργασία των δειγμάτων που είχαν συλλεχθεί την προηγούμενη καλλιεργητική
περίοδο. Η επεξεργασία περιέλαβε μοριακή ανίχνευση με εξωτερικό και εσωτερικό ζεύγος εκκινητών
(nested PCR) προσδιορισμό της νουκλεοτιδικής αλληλουχίας των προϊόντων της PCR, και σύγκριση
των αποτελεσμάτων με αντίστοιχα δεδομένα από διεθνείς βάσεις κατατεθειμένων νουκλεοτιδικών
αλληλουχιών. Ο μοριακός χαρακτηρισμός και η φυλογενετική ανάλυση των αποτελεσμάτων
συνεχίζεται στα δείγματα φυτικών ιστών του 2014, ενώ θα συλλεχθούν και επιπλέον δείγματα φυτικών
ιστών από διαφορετικές περιοχές της χώρας κατά την άνοιξη 2015. Παράλληλα, εκτελέστηκαν
πειραματικές εργασίες μελέτης του μοριακού μηχανισμού παθογένεσης που διεγείρεται κατά την
αλληλεπίδραση του παθογόνου βακτηρίου
Erwinia amylovora
με φυτά ξενιστές του διαφορετικής
ευπάθειας. Συνοπτικά, οι εργασίες και τα σχετικά αποτελέσματα έχουν ως εξής: δενδρύλλια αχλαδιάς
δύο ποικιλιών (μιας πολύ ευπαθούς και μιας μετρίως ανθεκτικής) που αναπτύσσονται εντός
θερμοκηπιόυ, μολύνθηκαν τεχνητώς με το παθογόνο
Erwinia amylovora
, και έγινε σύγκριση του
μεταγραφικού προφίλ των μολυσμένων ιστών κατά τις πρώτες ώρες της αλληλεπίδρασης. Για τη
σύγκριση εφαρμόστηκε η μέθοδος του κατασταλτικού αφαιρετικού υβριδισμού (suppression
subtractive hybridization, SSH) επί βιβλιοθηκών cDNA από μολυσμένα ευπαθή ή μετρίως ανθεκτικά
φυτά και μη μολυσμένα φυτά, σε διάφορους συνδυασμούς. Συνολικά από τη μέθοδο SSH προέκυψαν
1152 EST κλώνοι των οποίων η νουκλεοτιδική αλληλουχία προσδιορίστηκε και συγκρίθηκε με
αντίστοιχες κατατεθειμένες σε διεθνείς βάσεις δεδομένων. Η ανάλυση των αποτελεσμάτων και η
εξαγωγή συμπερασμάτων ως προς το μοριακό μηχανισμό που εμπλέκεται στην εκδήλωση
διαφορετικής ευπάθειας στα φυτά ξενιστές είναι υπό εξέλιξη.
Επίσης, για την πραγματοποίηση των απαραίτητων επισκευών του θερμοκηπίου του
Εργαστηρίου Βακτηριολογίας που προβλεπόταν στο πρόγραμμα, συντάχθηκαν οι σχετικές τεχνικές
προδιαγραφές και δρομολογήθηκαν οι διαδικασίες προκήρυξης και ανάθεσης του έργου.
Δ. Για την κατασκευή του διαγνωστικού πλακίδιου μικροσυστοιχιών που θα επιτρέπει την γρήγορη και
ευαίσθητη ανίχνευση και ταυτοποίηση φυτοπαθογόνων σε γιγαρτόκαρπα και πυρηνόκαρπα
Εικόνα 2.2.1.α.
Ιστοκαλλιέργεια φυτών αχλαδιάς, μολυσμένων με το ιοειδές
PBCVd.
Εικόνα 2.2.1.β.
Καλλιέργεια βλαστοκορυφών σε ειδικό υπόστρωμα για
εμπλουτισμό με σουκρόζη, προτού τοποθετηθούν στο διάλυμα κρυοπρο-
στασίας.
Εικόνα 2.2.1.γ.
Βύθιση κρυοσωλήνων στο υγρό άζωτο. Περιέχουν
βλαστοκορυφές σε διάλυμα κρυοπροστασίας.
α
γ
β
