124
ημέρα μετά τη γέννηση, P22) και η δόση που χορηγήθηκε ήταν στα επίπεδα NOAEL (No Observed
Adverse Effects Levels), όπως έχουν προκύψει από τα πειράματα που έχουν διενεργηθεί για την
έγκριση κυκλοφορίας των δραστικών ουσιών σε Ευρωπαϊκό επίπεδο.
Στη συνέχεια λαμβάνονται ιστοί εγκεφάλου από νεογνά στις ηλικές Postnatal Day 2 (P2), P6, P10,
P14, P20 και P22. Στους ιστούς που λαμβάνονται γίνονται τα εξής:
Ιστολογικές χρώσεις:
Οι ιστοί μονιμοποιούνται και επέξεργάζονται κατάλληλα, εγκλίονται σε παραφίνη και λαμβάνονται
τομές, στις οποίες γίνεται ιστολογική χρώση με cresyl violet και thionine προκειμένου να χρωματιστούν
κατάλληλα οι διάφορες περιοχές και πυρήνες του εγκεφάλου (Εικόνα 4.4.2-1).
Ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις / χρώσεις για εντοπισμό πρωτεϊνών-δεικτών:
Ορισμένοι άλλοι ιστοί επεξεργάζονται κατάλληλα και λαμβάνονται τομές κρυοτόμου, στις οποίες
γίνεται ανοσοεντοπισμός συγκεκριμένων πρωτεϊνών – δεικτών που εκφράζονται μόνο από
συγκεκριμένους πληθυσμούς σε καθορισμένες φάσεις της ανάπτυξης της παρεγκεφαλίδας (Εικόνα
4.4.2-2). Οι πρωτεϊνες που ανιχνέυονται είναι οι εξής:
TAG-1: Μόριο συνάφειας που εκφράζεται από τα κοκκώδη κύτταρα της παρεγκεφαλίδας, αφού
ολοκληρώσουν τις μιτωτικές τους διαιρέσεις στη στοιβάδα EGL και πριν ξεκινήσουν τη
μετανάστευσή τους στην IGL.
GFAP: Είναι πρωτεΐνη που εκφράζεται από τα αστροκύτταρα. Αύξηση της GFAP συνδέεται με
βλάβες δομών του KNΣ.
CaBP (Ca-binding protein): Εκφράζεται στα σώματα και στο δενδριτικό πεδίο των κυττάρων
Purkinje και έτσι μπορούμε να διακρίνουμε τυχών αλλοιώσεις που υπάρχουν σε αυτό.
Οι τομές παρατηρούνται στο μικροσκόπιο και ακολουθεί ανάλυση εικόνας, ώστε να διαπιστωθεί
εάν η χορήγηση της μελετούμενης ουσίες επιφέρει κάποια αλλοιώση στην αναπτυσσόμενη
παρεγκεφαλίδα.
Η επεξεργασία των αποτελέσματων είναι υπό εξέλιξη.
Η επεξεργασία των ιστών καθώς και η αξιολόγηση των αποτελέσματων της παρούσας μελέτης
είναι υπό εξέλιξη.
Εικόνα 4.4.2-1.
Τομές παραφίνης παρεγκεφαλίδας επίμυος ηλικίας 10 και 14 ημερών μετά τη γέννηση βαμμένες
με ιστολογική χρώση cresyl violet και thionine.
