Page 53 - ektheseis 2012

51
Αρχικά δημιουργήθηκε συλλογή φυτικών ιστών μολυσμένων με τους σημαντικότερους ιούς, ιοειδή και
φυτοπλάσματα μηλοειδών, ώστε να χρησιμοποιηθεί στην ανάπτυξη και αξιολόγηση των διαγνωστικών
εργαλείων που προβλέπονται στο Πρόγραμμα. Το υλικό προήλθε από τη συλλογή του Εργαστηρίου
Ιολογίας [υποκείμενα ροδακινιάς GF305 μολυσμένα με Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV), φυτά
αχλαδιάς που εμβολιάστηκαν με το ιοειδές Pear blister canker viroid (PBCVd)], από το εργαστήριο
Φυτοπαθολογίας του Αριστοτελείου Πανεπιστημίου Θεσσαλονίκης καθώς και από τα Ινστιτούτα INRA και
CTIFL της Γαλλίας. Αξιολογήθηκαν επιτυχώς εκκινητές για την ανίχνευση των ιών ACLSV και ASPV
(Menzel et al., 2002) με την κλασική μοριακή μέθοδο της αντίστροφης μεταγραφής - αλυσιδωτής
αντίδρασης της πολυμεράσης (RT-PCR) καθώς και του ιοειδούς PBCVd (Boubourakas et al., 2008), ενώ
σε εξέλιξη βρίσκονται και οι μέθοδοι ελέγχου για τους υπόλοιπους ιούς. Στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε
σχεδιασμός εκκινητών και ιχνηλατών Τaqman για ανίχνευση των ιών ACLSV, Apple stem pitting virus
(ASPV), Apple stem grooving virus (ASGV), Apple mosaic virus (ApMV) και των ιοειδών PBCVd και Apple
scar skin viroid (ASSVd), με τη μέθοδο της πραγματικού χρόνου αντίστροφης μεταγραφής - αλυσιδωτής
αντίδρασης της πολυμεράσης (Real time RT-PCR). Τα ζεύγη εκκινητών-ιχνηλατών για τους ιούς ApMVκαι
ASGV ήταν αποτελεσματικά. Σε μια πρώτη δοκιμή ταυτόχρονης διπλής (duplex) ανίχνευσης με τη μέθοδο
της Real time RT-PCR των δύο αυτών ιών, δεν υπήρξε ανίχνευση του ιού ASGV, και συνεπώς οι συνθήκες
της αντίδρασης (συγκεντρώσεις εκκινητών και ανταγωνισμός μεταξύ των στόχων) θα πρέπει να
βελτιστοποιηθούν. Ταυτόχρονα, πραγματοποιήθηκε αλληλούχηση τμήματος του γονιδίου της καψιδιακής
πρωτεϊνης (εκκινητές από Menzel et al., 2002) ορισμένων από τις ελληνικές απομονώσεις του ACLSV που
έχουμε στη διάθεσή μας ώστε σχεδιαστεί ο βέλτιστος ιχνηλάτης. Παράλληλα με τα παραπάνω,
διενεργήθηκαν δοκιμές διαφόρων μεθόδων εξαγωγής RNA από φυτικούς ιστούς μηλοειδών, λόγω
προβλημάτων που παρουσιάζονται στην καθαρότητα του προϊόντος. Το πρωτόκολλο το οποίο έδωσε τα
καλύτερα αποτελέσματα σε ιστό από φύλλα καθώς και σε ιστό από βλαστούς και μένει να δοκιμαστεί η
αποτελεσματικότητά του και στην real time PCR, είναι αυτό που περιγράφουν οι Gambino et al. (2008,
Rapid CTAB RNA extraction).
β. Εξυγίανση αχλαδιάς ποικ. Κοντούλα από το ιοειδές PBCVd
Έγινε εντοπισμός και συλλογή των απαραίτητων σπόρων, εμβολίων και υποκειμένων μηλοειδών
που είναι απαραίτητα για την εξυγίανση αχλαδιάς, ποικιλίας Κοντούλα, από το ιοειδές PBCVd με τις
μεθόδους της θερμοθεραπείας και μικροεμβολιασμού ακραίου μεριστώματος (Conejero et al., 2013 και
Huang and Millikan, 1980).
ΣΥΝΤΟΝΙΣΤΗΣ Καθ. Ν. Κατής
ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΕΡΓΟΥ 24.1.2012 - 23.1.2015
ΕΜΠΛΕΚΟΜΕΝΟ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟ Δρ. Χ.Βαρβέρη, Δρ Ν. Βασιλάκος, Δρ
Ν. Σκανδάλης, Δρ Μ. Χολέβα, Ι.
Μαλανδράκη Χ. Καράφλα, Π.Ε.
Γλυνός, Σ. Δρακούλης
ΣΧΕΤΙΚΗ ΕΝΟΤΗΤΑ “ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΑ ” 2.1.2
2.2.3 Μελέτη ασθενειών οικονομικής σημασίας γεωργικών καλλιεργειών ως προς τη
διάγνωση ή/και την παραλλακτικότητα των παθογόνων βακτηρίων που τις
προκαλούν, με έμφαση σε εκείνες τις ασθένειες που οφείλονται στα:
Pseudomonas syringae pv. actinidiae, Ralstonia solanacearum, πηκτινολητικά
είδη του γένους Erwinia, Pseudomonas tolaasii και Acidovorax avenae subsp.
citrulli.
Κατά το έτος 2012, συνεχίστηκε η μελέτη ασθενειών που οφείλονται σε σοβαρά φυτοπαθογόνα