Page 59 - ektheseis 2012

57
C1 να μολύνουν φυτά πιπεριάς, δημιουργήθηκε μια σειρά από μολυσματικούς ιϊκούς κλώνους που
ήταν υβρίδια μεταξύ απομονώσεων PVY-C1 και PVY-N καθώς και PVY-C1 και PVY-C2, καλύπτοντας
σε διάφορους συνδυασμούς ολόκληρο το γονιδίωμα του PVY. Τα πειράματα μολυσματικότητας σε
φυτά πιπεριάς με τους παραπάνω υβριδικούς μολυσματικούς κλώνους αποκάλυψαν ότι οι
γονιδιωματικές περιοχές που είναι υπεύθυνες για την μολυσματικότητα του PVY στην πιπεριά είναι
αυτές που αντιστοιχούν στις πρωτεΐνες P3/PIPO και CI. Επιπλέον, μικροσκοπία φθορισμού μιας
απομόνωσης PVY-N, που έφερε το γονίδιο σήμανσης της πράσινης φθορίζουσας πρωτεΐνης (Green
Fluorescent Protein, GFP), έδειξε περιορισμό του ιού σε μικρό αριθμό κυττάρων στα φύλλα πιπεριάς
όπου πραγματοποιήθηκε η μηχανική μόλυνση με τον ιό, επιτρέποντας μια πρώτη εκτίμηση για τη
φύση του συγκεκριμένου μηχανισμού ανθεκτικότητας.
2. Βακτήρια
Α. Στο πλαίσιο του Προγράμματος πραγματοποιήθηκε έρευνα σε θέματα διάγνωσης και μοριακής
επιδημιολογίας βακτηριολογικών ασθενειών με έμφαση στην ασθένεια ‘Βακτηριακό κάψιμο των
μηλοειδών’. Η έρευνα αυτή πραγματοποιήθηκε κατά την επιστημονική επίσκεψη (secondment)
της Δρος Μ.Κ. Χολέβα στο Εργαστήριο Βακτηριολογίας του Ερευνητικού Κέντρου Instituto
Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA) στην πόλη Valencia της Ισπανίας (26 Αυγούστου
2012- 21 Δεκεμβρίου 2012). Η έρευνα αυτή θα συνεχιστεί στο Εργαστήριο Βακτηριολογίας του
ΜΦΙ με τη συνεργασία των Dr M. Lopez, Dr M. Cambra και Dr P. Llop (IVIA).
Β. Η σίγηση RNA (RNA interference, RNAi) έχει χαρακτηριστεί ως μηχανισμόs άμυνας των
οργανισμών ενάντια στην προσβολή τους από ξένο γενετικό υλικό. Πρόσφατα πειραματικά
δεδομένα φανερώνουν την εμπλοκή της RNAi και στην αλληλεπίδραση των φυτών με
φυτοπαθογόνα βακτήρια. Σκοπός της εργασίας ήταν η διερεύνηση της επίδρασης της RNAi στην
αλληλεπίδραση των φυτών με ημιβιοτροφικά φυτοπαθογόνα βακτήρια. Για το σκοπό αυτό
χρησιμοποιήθηκαν τροποποιημένα φυτά Nicotiana benthamiana στα οποία είχε ανασταλεί
ξεχωριστά ή σε συνδυασμό η έκφραση βασικών πρωτεϊνών ρυθμιστών της RNAi (dcl-1, dcl-2,
dcl-3, dcl-4, rdrp6). Πραγματοποιήθηκαν μολύνσεις με μια σειρά φυτοπαθογόνων βακτηρίων που
μολύνουν τοπική και διασυστηματικά τα φυτά ξενιστές. Σε συγκεκριμένες αλληλεπιδράσεις όπου
διαγονιδιακές σειρές παρουσίασαν αυξημένη ευπάθεια σε σύγκριση με το μάρτυρα,
πραγματοποιήθηκαν πληθυσμιακές αναλύσεις σε 3 επαναλήψεις και τρία ανεξάρτητα πειράματα.
Τα αποτελέσματα των επαναλήψεων ήταν συγκρίσιμα και αποκάλυψαν όχι μόνο αυξημένους -σε
στατιστικά σημαντικό βαθμό - πληθυσμούς βακτηρίων έναντι του μάρτυρα, αλλά και πως
συγκεκριμένες γονιδιακές σιγήσεις που σχετίζονται με το μηχανισμό της σίγησης έχουν επίδραση
στην εκδήλωση της άμυνας του φυτού σε σημείο που να επιδρούν στο εύρος των ξενιστών του.
Στις σειρές αυτές πραγματοποιήθηκε με τη χρήση Agrobacterium tumefaciens παροδική έκφραση
πρωτεινών τελεστών του εκκριτικού συστήματος τύπου ΙΙΙ που φέρονται σε δυαδικούς φορείς
έκφρασης. Σκοπός ήταν να διερευνηθούν οι αλλαγές στο φαινότυπο που προκαλούν οι
συγκεκριμένες πρωτεϊνες, οι οποίες λειτουργούν ως επαγωγείς (elicitors) ή καταστολείς
(suppresors) του αμυντικού συστήματος των φυτών.
Τα ανωτέρω έγιναν στο πλαίσιο υλοποίησης του έργου: Development of Benaki
Phytopathological Institute as a Centre of Excellence in plant health and Crop protection (FP7-
REGPOT-2008-1, No230010).
ΣΥΝΤΟΝΙΣΤΗΣ Δρ Α. Μαρκέλλου
ΕΜΠΛΕΚΟΜΕΝΟ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟ Δρ. Χ. Βαρβέρη, Δρ Ν. Βασιλάκος,
Δρ Ν. Σκανδάλης, Δρ Μ. Χολέβα
ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΕΡΓΟΥ 1.5.2009 - 31.8.2013
ΣΧΕΤΙΚΗ ΕΝΟΤΗΤΑ “ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΑ ” 1.2.4