76
4.4.2 Μελέτη των επιδράσεων της χορήγησης πυρεθροειδών στην ανάπτυξη της
παρεγκεφαλίδας σε επίμυες φυλής Wistar
Σκοπός της παρούσας εργασίας είναι η μελέτη των επιδράσεων της χορήγησης πυρεθροειδών
κατά την περίοδο της ανάπτυξης του νευρικού συστήματος επίμυων της φυλής Wistar Rats.
Τα πυρεθροειδή είναι ουσίες με εντομοκτόνο δράση, οι οποίες περιέχονται σε πολλά
φυτοπροστατευτικά και βιοκτόνα προιόντα που χρησιμοποιούνται σε μεγάλη κλίμακα. Ωστόσο, πρόσφατα
έχουν ενοχοποιηθεί για επιδράσεις στην ανάπτυξη του Κεντρικού Νευρικού Συστήματος στην πρίπτωση
έκθεσης των μητέρων κατά τη διάρκεια της εμβρυογένεσης. Η πιθανότητα μιας τέτοιας επίδρασης όπως
είναι προφανές είναι ιδιαίτερα μεγάλης σημασίας για την ασφάλεια του αγροτικού αλλά και του γενικότερου
πληθυσμού από την έκθεση του σε γεωργικά φάρμακα (φυτοπροστετυτικά και βιοκτόνα προιόντα).
Στην παρούσα μελέτη, πυρεθροειδή χορηγούνται σε επίμυες κατά τη φάση της ανάπτυξης του
νευρικού συστήματος και μελετώνται οι επιδράσεις που πιθανόν επιφέρουν σε διάφορους
πληθυσμούς νευρικών κυττάρων της παρεγκεφαλίδας.
Σε πρώτη φάση, η χορήγηση της εξεταζόμενης ουσίας ξεκίνησε από την εμβρυική ημέρα 14
(Ε14) και ολοκληρώθηκε αμέσως μετά τον απογαλακτισμό των νεογνών (22η ημέρα μετά τη γέννηση,
P22), περίοδος κατά την οποία ολοκληρώνεται η ανάπτυξη της δομής της παρεγκεφαλίδας στους
επίμυες. Σε δέυτερη φάση, η χορήγηση ξεκίνησε από την εμβρυική ημέρα 14 (Ε14) και ολοκληρώθηκε
την μέρα P35 (αρκετά αργότερα από τον σχηματισμό της παρεγκεφαλίδας) με σκοπό να διερευνηθεί η
αναστρεψιμότητα των δράσεων των πυρεθροειδών. Η δόση που χορηγήθηκε ήταν στα επίπεδα
NOAEL (No Observed Adverse Effects Levels), όπως αυτές προκύπτουν από τις αξιολογήσεις της
EFSA.Στη συνέχεια λήφθηκαν ιστοί εγκεφάλου από νεογνά στις ηλικίες Postnatal Day 2 (P2), P6, P10,
P14, P20, P22, Ρ32 και Ρ35. Στους παραπάνω ιστούς πραγματοποιήθηκαν:
Ιστολογικές χρώσεις:
Οι ιστοί μονιμοποιούνται και επεξεργάζονται κατάλληλα, εγκλείονται σε παραφίνη και
λαμβάνονται τομές, στις οποίες ακολουθεί ιστολογική χρώση με cresyl violet και thionine προκειμένου
να χρωματιστούν κατάλληλα οι διάφορες περιοχές και πυρήνες του εγκεφάλου (Εικόνα 1).
Εικόνα 1.
Τομές παραφίνης παρεγκεφαλίδας
επίμυος ηλικίας 10 και 14 ημερών μετά τη
γέννηση ύστερα από ιστολογική χρώση cresyl
violet και thionine.
Άλλοι ιστοί επεξεργάζονται κατάλληλα και λαμβάνονται τομές κρυοτόμου, στις οποίες γίνεται
ανοσοεντοπισμός συγκεκριμένων πρωτεϊνών – δεικτών που εκφράζονται μόνο από συγκεκριμένους
κυτταρικούς πληθυσμούς σε καθορισμένες φάσεις της ανάπτυξης της παρεγκεφαλίδας (Εικόνα 2).
Ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις / χρώσεις για εντοπισμό πρωτεϊνών-δεικτών:
Οι πρωτεϊνες που ανιχνεύονται είναι οι εξής:
