82
μεθόδου ICW-apoptosis assay. Τα αποτελέσματα από τη δοκιμή της απόπτωσης επιβεβαιώνουν ότι η
κυτταροτοξικότητα που προκαλούν οι παραπάνω ουσίες στα συγκεκριμένα καρκινικά κύτταρα, δεν
οφείλεται σε νέκρωση αλλά σε ενεργοποίηση του αποπτωτικού μηχανισμού, του οποίου η
δυσλειτουργία είναι άμεσα σχετιζόμενη με την καρκινογένεση. Tα ευρήματα της παρούσας μελέτης
είναι σε συμφωνία με τις σχετικές δημοσιεύσεις που αναφέρονται σε αντικαρκινική δράση της
Μαστίχας Χίου και των κλασμάτων της. Ταυτόχρονα, η ένδειξη προστατευτικής δράσης είναι πιθάνον
μετά από περεταίρω μελέτη, να καταστήσει αυτές τις ουσίες αποτελεσματικούς προστατευτικούς
παράγοντες έναντι των επαγόμενων από το οξειδωτικό στρες αλλοιώσεων του DNA. Μελλοντικά
πειράματα τα οποία περιλαμβάνουν τη μελέτη ενζυμικών δεικτών με Real-Time PCR για τον
προσδιορισμό της επίδρασης εκχυλισμάτων και καθαρών μορίων της μαστίχας στα επίπεδα ενζύμων
που συμμετέχουν στη βιομετατροπή προ-καρκινογόνων μεταβολιτών καθώς και χρήση πρωτογενών
κυττάρων αναμένεται να αρχίσουν μέσα στο 2016.
Τ
ΜΗΜΑ
Ελέγχου Γεωργικών Φαρμάκων και Φυτοφαρμακευτικής
Ε
ΡΓΑΣΤΗΡΙΟ
Τοξικολογικού Ελέγχου Γεωργικών Φαρμάκων
Υ
ΠΕΥΘΥΝΕΣ
Ε
ΡΓΟΥ
Δρ Ε. Κατσάνου, Δρ Κ. Μαχαίρα
Ε
ΜΠΛΕΚΟΜΕΝΟ
Π
ΡΟΣΩΠΙΚΟ
Β. Λάσκαρη, Δρ Κ. Κυριακοπούλου
Δ
ΙΑΡΚΕΙΑ
Ε
ΡΓΟΥ
1.9.2014 – 31.12.2015
Κ
ΑΛΥΨΗ
Δ
ΑΠΑΝΗΣ
100% ΜΦΙ
4.4.5 Αποτίμηση της ασφάλειας φυτικών εκχυλισμάτων και των δευτερογενών μετα-
βολιτών τους με
in vitro
και
in vivo
δοκιμασίες
Λόγω του εξαιρετικά μεγάλου οικονομικού ενδιαφέροντος της καλλιέργειας της ελιάς και των
προϊόντων της για τη χώρα μας αλλά και λόγω του μεγάλου ενδιαφέροντος της διεθνούς αγοράς για τα
προϊόντα αυτά και με γνώμονα την υποστήριξη των Ελληνικών προϊόντων και Ελλήνων παραγωγών,
διενεργούνται δοκιμές προσδιορισμού τοξικότητας εκχυλισμάτων ελιάς καθώς και ουσιών που
απομονώνονται από αυτά.
Μετά από βιβλιογραφική μελέτη σχετικά με τα στοιχεία που υπάρχουν διαθέσιμα στη διεθνή
βιβλιογραφία όσον αφορά στην τοξικότητα των μεταβολιτών της ελιάς, η μελέτη εστιάζεται στην
αποτίμηση της τοξικότητας των ουσιών: tyrosol, hydroxytyrosol, oleocanthal, oleuropein, oleacin και
maslinic acid.
Στην παρούσα μελέτη εξάστηκε η τοξικότητα των ανωτέρω μεταβολιτών καθώς και η τοξικότητα
εκχυλίσματος φύλλων ελιάς, ελαιολάδου και δρύπης, ώστε να είναι δυνατή η σύγκριση των
επιδράσεων του εκχυλίσματος/μίγματος με αυτές που προκαλούνται από τις μεμονωμένες ουσίες που
τα αποτελούν.
Σε πρώτη φάση πραγματοποιούνται οι εξής
in vitro
βιοδοκιμές τοξικότητας:
-
μελέτη κυτταρικού πολλαπλασιασμού και κυτταροτοξικότητας με τη χρήση χρωμογόνου MTT,
-
μελέτη της απόπτωσης με τη μέθοδ «Ιn Cell Western - apoptosis assay»,
-
μελέτη επαγωγής οξειδωτικού stress και γονοτοξικότητας με τη μέθοδο COMET assay
Σε δεύτερη φάση πραγματοποιούνται πειράματα προσδιορισμού οξείας τοξικότητας των
εκχυλίσματων φύλλων ελιάς, ελαιολάδου και δρύπης σε επίμυες και πιθανόν πειράματα
προσδιορισμού της γονοτοξικής δράσης τους σε
in vivo
συνθήκες. Ο σχεδιασμός των
in vivo
πειραμάτων εξαρτάται από τα αποτελέσματα των
in vitro
δοκιμών.
Μετά την
in vitro
μελέτη πιθανών επιδράσεων στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό
(κυτταροτοξικότητα) με χρήση χρωμογόνου MTT για τις ουσίες tyrosol, hydroxytyrosol, oleacin,
oleocanthal, oleuropein που πραγματοποιήθηκαν κατά τη διάρκεια του 2014 συνεχίστηκε ο
in vitro
πειραματισμός με τη μέθοδο COMET assay. Όλες οι δοκιμές έως τώρα έχουν γίνει με κύτταρα HepG2
που καλλιεργήθηκαν σε υλικό κυτταροκαλλιεργειών που περιείχε sodium bicarbonate.
