Page 117 - 2009

Α. Ερευνα - Εφαρμογές - Παρατηρήσεις 116
17. Ανάπτυξη μεθόδου για τον ποσοτικό προσδιορισμό τοξικολογικά σημαντι-
κών προσμείξεων σε σκευάσματα Φυτοπροστατευτικών Προϊόντων.
Σκοπός-Αντικείμενο: Σκοπός της εργασίας ήταν η ανάπτυξη γρήγορης και αξιόπι-
στης μεθόδου για τον ποσοτικό προσδιορισμό τοξικολογικά σημαντικών προσμείξεων
n-νιτροζαμινών σε σκευάσματα ζιζανιοκτόνων δινιτροανιλινών.
Η μεθοδολογία που αναπτύχθηκε αφορά στην προετοιμασία δείγματος αρχικά με κα-
θαρισμό σε φυσίγγιο εκχύλισης στερεάς φάσης. Στη συνέχεια ο ποιοτικός και ποσοτικός
προσδιορισμός πραγματοποιείται με συνδυασμό των τεχνικών αέριας χρωματογραφίας
με ανιχνευτή ιονισμού φλόγας (GC-FID) και αέριας χρωματογραφίας φασματοσκοπία μά-
ζας τριπλού τετραπόλου με χημικό ιονισμό (GC-CI-MS/MS)
(Γ.Π. Μπαλαγιάννης, Ελένη Καρασαλή, Ν.Α. Τάμπας και Σ.Α. Ιωάννου)
18.Δραστικότητα του ενζύμου CYP1A1/2 σε ήπαρ επίμυων (μέτρηση EROD).
Τα κυτοχρώματα της οικογένειας 1Α αποτελούν μια σημαντική κατηγορία κυτοχρω-
μάτων στα θηλαστικά, τα οποία πέρα άλλων υποστρωμάτων, μεταβολίζουν και διοξίνες,
PCBs και PAHs προς δραστικά καρκινογόνα παράγωγα.
Τα CYP1A επιτελούν κλασικές αντιδράσεις Φάσης Ι όπως οξείδωση, απαλκυλίωση και
υδροξυλίωση. Ένας φθοριομετρικός τρόπος υπολογισμού της δραστικότητας των κυ-
τοχρωμάτων CYP1A1/2 (κυτοχρωμάτων τα οποία δραστηριοποιούνται μέσω σύνδεσης
υποστρώματος στον υποδοχέα Αh) είναι ο ρυθμός απαλκυλίωσης της ethoxyresorufin
(ER) προς resorufin στα 550/582 nm όπως φαίνεται στο διάγραμμα.
Επίμυες της φυλής Wistar χωρίστηκαν σε 2 ομάδες (3 ζώα ανά ομάδα) και στη μία ομά-
δα (πειραματική ομάδα) χορηγήθηκε καφεΐνη σε δόση 100 mg/kg σωματικού βάρους/
ημέρα για 3 συνεχόμενες ημέρες και στη δεύτερη ομάδα (ομάδα ελέγχου) χορηγήθηκε ο
φορέας διάλυσης της καφεΐνης κατά τον ίδιο τρόπο όπως και στην πειραματική ομάδα.
Στο τέλος της χορήγησης τα ζώα θυσιάστηκαν με εισπνοή CO2. Ακολούθως, έγινε διοχέ-
τευση PBS (phosphate buffer saline) μέσω της πυλαίας φλέβας των ζώων με σκοπό την
απομάκρυνση της περίσσειας του αίματος από το ήπαρ. Στη συνέχεια τμήματα ήπατος
αποθηκεύθηκαν σε υγρό άζωτο. Τα τμήματα (0,4 g) αποψύχθηκαν σε θερμοκρασία δω-
ματίου και ομογενοποιήθηκαν σε 2 mL διαλύματος παγωμένης σακχαρόζης (IKA ultra-
turrax T 25, IKA). Μετά από ζύγιση σε δεύτερο δεκαδικό ψηφίο το διάλυμα φυγοκεντρή-
θηκε σε 9000 g για 20 min (Sorvall Ultracentrifuge). Το υπερκείμενο ζυγίστηκε σε δεύτερο
δεκαδικό ψηφίο και φυγοκεντρήθηκε σε 100.000 g για 1 h (Sorvall Ultracentrifuge). Το
Εικόνα 1. Απαλκυλίωση της ethoxyresorufin προς resorufin.