Page 120 - 2009

Έκθεση Εργασιών 2009 119
20.Προσδιορισμός επιπέδων και διερεύνηση των μηχανισμών επιδράσεων
υψηλών δόσεων thiram στο DNA του μυδιού M. galloprovincialis μετά από
ημιστατική έκθεση σε νερό ενυδρείου.
Το μυκητοκτόνο Τhiram εξετάσθηκε ως προς την ικανότητά του να προκαλέσει
αλλαγές στο γενετικό υλικό. Ως μοντέλο μελέτης χρησιμοποιήθηκε ο οργανισμός M.
galloprovincialis και πιο συγκεκριμένα οι ιστοί του βράγχια, αιμολέμφος και πεπτικός αδέ-
νας, μετά από την έκθεση σε υψηλές συγκεντρώσεις. Σημειώνεται πως οι συγκεντρώσεις
που μελετήθηκαν δεν αναμένεται να υπάρξουν στο περιβάλλον μιας και η συγκεκριμένη
μελέτη δεν αποτελεί περιβαλλοντική εκτίμηση του κινδύνου αλλά στοχεύει στην μελέτη
αυτού καθ’ αυτού του φαινομένου της γονοτοξικότητας.
Κατά την διάρκεια του πειράματος, 8 μύδια ανά πειραματική κατηγορία (4 μύδια/πο-
τήρι ζέσεως) τοποθετήθηκαν σε ποτήρι ζέσεως 2 L (Simax, Czech Republic) με θαλασσινό
νερό για 48 ώρες. Εν συνεχεία προστέθηκε θαλασσινό νερό φορτισμένο με τις ονομα-
στικές συγκεντρώσεις Thiram όπως αυτές καταγράφονται στον Πίνακα 1. Το νερό αντικα-
θίσταται κάθε 12 ώρες. Κατά την διάρκεια της έκθεσης τα πειραματόζωα δεν λάμβαναν
τροφή. Η γενική μακροσκοπική κατάσταση των μυδιών (έκκριση βλέννας, αντίδραση
σε ερεθίσματα, προσκόλληση στα υάλινα τοιχώματα κλπ) καθώς και ο αριθμός νεκρών
ζώων καταγραφόταν καθ’ όλη την διάρκεια του πειράματος.
Μετά το πέρας της έκθεσης τα ζώα θυσιάστηκαν και οι ιστοί αποσπάστηκαν προκει-
μένου να υποβληθούν σε περαιτέρω διεργασία. Για τον προσδιορισμό των επιπέδων του
Τhiram στα δείγματα πραγματοποιήθηκε αρχικά ομογενοποίηση του δείγματος μυδιών
και στη συνέχεια λυοφιλοποίηση. Το thiram εκχυλίστηκε (συσκευή Soxhlet, διάρκεια 4h)
από το ξηρό δείγμα με μίγμα διαλυτών ethyl acetate/hexane (1:1, 200 mL). Στη συνέχεια
ο διαλύτης εξατμίστηκε και το μίγμα επαναδιαλύθηκε σε 2 mL ethyl acetate. Στο μίγμα
προστέθηκε χαλκός έγινε ανάδευση για 5 min ώστε να καταβυθισθούν τα θειούχα μόρια
που πιθανώς περιέχει το δείγμα και ακολούθησε φυγοκέντριση (1500rpm για 4 λεπτά).
Η οργανική στοιβάδα διαβιβάστηκε σε μικρή στήλη που περιείχε πακτωμένο το υλικό
Florisil (Florisil SPE cartridges, Waters, SEP-PAK® Cartridges) ώστε να εκχυλιστεί σε στερεά
φάση, υπό κενό (IST VacMaster apparatus). Τέλος η οργανική φάση εγχύθηκε στον υγρό
χρωματογράφο φασματομετρίας μάζας (εταιρεία Shimadzu, μοντέλο LCMS-2010 EV
Liquid Chromatograph Mass Spectrometer, Kyoto, Japan) όπου πιστοποιήθηκε η ύπαρξη
του thiram. Για τον ποσοτικό προσδιορισμό των επιπέδων του Τhiram κατασκευάστηκε
η αντίστοιχη καμπύλη αναφοράς. Η χαμηλή δόση (0,1 mg/L) δεν προκάλεσε βιοσυσώρ-
ρευση του σε ανιχνεύσιμα επίπεδα, σε αντίθεση με την μεσαία (1.0 mg/L) και την υψηλή
(10.0 mg/L) δόση οι οποίες προκάλεσαν δοσοεξαρτώμενη βιοσυσσώρευση του μυκητο-
κτόνου μετά από την έκθεση των 48 ωρών.
Πίνακας 1. Ονομαστικές συγκεντρώσεις έκθεσης σε Thiram σε συνθήκες στατικής έκθεσης.
Πειραματική
κατηγορία Μάρτυρας Χαμηλή Δόση Μεσαία Δόση Υψηλή Δόση
Ονομαστική
συγκέντρωση
(Thiram) (mg/L)
0 0,1 1,00 10,00