Page 122 - 2009

Έκθεση Εργασιών 2009 121
κής ομάδας εξαρτιόταν άμεσα από τον εξεταζόμενο ιστό.
Επιπλέον, για την μεσαία δόση 1,00 mg/L παρεμβλήθηκε επώαση με το ένζυμο
formamidopyrimidine glycosylase (Fpg) μετά την λύση και πριν την μεταφορά στην συ-
σκευή ηλεκτροφόρησης προκειμένου να ποσοτικοποιηθούν οι οξειδωτικές βλάβες στο
DNA που προκλήθηκαν από το Thiram. Αναλυτικά, οι αντικειμενοφόροι πλύθηκαν με
διάλυμα Fpg και σε 2 από τις 4 αντικειμενοφόρους ανά μύδι προστέθηκε 1 μονάδα
ενζύμου Fpg (AMS Biotechnology, UK) σε διάλυμα Fpg (50 μl). Στις υπόλοιπες 2 αντικειμε-
νοφόρους προστέθηκε μόνο διάλυμα Fpg χωρίς το ένζυμο (50 μl). Μια καλυπτρίδα προ-
στέθηκε σε κάθε αντικειμενοφόρο και το σύνολο των παρασκευασμάτων αποθηκεύτηκε
σε πλαστικό αδιαφανές κουτί το οποίο περιείχε δύο στρώσεις υγρών χαρτιών. Το κουτί
καλύφθηκε εξ ολοκλήρου με αλουμινόχαρτο και επωάστηκε στους 37° C για 1 h. Στην
συνέχεια, τα παρασκευάσματα τοποθετήθηκαν σε οριζόντια συσκευή ηλεκτροφόρησης
και η διαδικασία που ακολουθήθηκε ήταν παρόμοια με αυτήν που περιγράφηκε προη-
γουμένως. Διαφορές μεταξύ μάρτυρα και ομάδας μεσαίας δόσης υπολογίσθηκαν μέσω
Student’s t-test για κάθε ιστό.
Επίσης, για την μεσαία δόση 1,00 mg/L, πραγματοποιήθηκε η διεργασία που περιγρά-
φηκε αρχικά με ολοκληρωτική απαλοιφή του σταδίου της ηλεκτροφόρησης με σκοπό
την μελέτη του φαινομένου της απόπτωσης. Ταυτόχρονα ένας θετικός μάρτυρας απο-
πτωτικής μορφολογίας (ένεση με 100 μL διαλύματος σταυροσπορίνης 1 μΜ στον προσα-
γωγό μύ δύο μυδιών και θανάτωση μετά από 4 h) αναλύθηκε μαζί με τα υπόλοιπα ζώα.
Διαφορές μεταξύ μάρτυρα και ομάδας μεσαίας δόσης υπολογίσθηκαν μέσω Student’s
t-test για κάθε ιστό.
Τα αποτελέσματα κατέδειξαν στατιστικά σημαντική άνοδο του% Fpg sensitive sites για
όλους τους ιστούς για την δόση Thiram που μελετήθηκε σε σχέση με τον μάρτυρα και στα-
τιστικά σημαντική άνοδο του % Apoptotic cells για τα βράγχια και τον πεπτικό μυ μόνο.
Πίνακας 3. two-way ANOVA και αντίστοιχες τιμές F που καταδεικνύουν την αλληλεξάρτηση ιστού-
ανταπόκρισης.
df MS F p
ιστός 2, 24 1516.17 79.81 0.0002
δόση 3, 24 993.18 52.31 <0.0001
ιστός*δόση 6, 24 128.82 6.78 0.0003
df: degrees of freedom, MS: mean square, F: F value, p: p value
Πίνακας 4. Ποσοστό αποπτωτικών κυττάρων και ευαίσθητων θέσεων σε Fpg μετά από έκθεση σε
1 mg/L Thiram.
Ομάδα αποπτωτικά κύτταρα (%)
Αιμολέμφος Βράγχια Πεπτικός αδένας
Μάρτυρας 0 0.25 ± 0.5 0.5 ± 0.6
1.0 mg/L 0 2 ± 0.41* 1.5 ± 0.6*
% ευαίσθητων θέσεων σε Fpg
Αιμολέμφος Βράγχια Πεπτικός αδένας
Μάρτυρας 0.37 ± 0.05 3.96 ± 1.91 12.46 ± 3.57
1.0 mg/L 3.80m ± 0.76** 28.04 ± 6.93*** 27.79 ± 6.09**